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    细胞适应B27无血清培养基的方法

    点击次数:329 发布时间:2018-07-29

    B27无血清培养基专门用来在无血清条件下培养特殊类型的细胞或进行特殊应用。
    B27无血清培养基的使用展现了一种重要的培养方法:允许细胞培养
    在一套限定条件下进行,尽可能避免受到干扰参数的影响。
     
    细胞适应B27无血清培养基的方法
    1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到B27无血清培养基中。
    一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应B27无血清培养基。对于直接适应,接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时,传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时,细胞完全适应了无血清培养基。每隔3~5天,当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
    2.连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到B27无血清培养基中,与直接适应相比较,连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
    (1)以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到80%有血清培养基:30%sfm混合培养基中,传代培养。
    (2)当细胞密度>5×105细胞/ml时,以2×105到3×105细胞/ml细胞密度,在有血清培养基:sfm为50∶50的混合培养基中传代培养。
    (3)以2×106到3×106细胞/ml细胞密度,25%有血清培养基和75%sfm中传代培养。
    (4)当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml(接种后4到6天),在100%sfm培养基中传代培养。
    (5)每隔3到5天,当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了B27无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

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